L-thioglutamic ایسڈایک قدرتی مصنوعہ مرکب ہے جو کہ نانی مونڈا سبزیوں جیسے کیلے، سرسوں کا ساگ اور بروکولی میں گلوکوزینولیٹ جیسے پیش خیمہ سے تبدیل ہوتا ہے۔ اس کے صحت کے مختلف اثرات ہیں، اور یہ کینسر، قلبی بیماری اور ذیابیطس جیسی دائمی بیماریوں کو روکنے کے لیے بڑے پیمانے پر استعمال ہوتا ہے۔ یہ بڑے پیمانے پر مصلوب پودوں میں پایا جاتا ہے، جیسے کیلے، گوبھی اور گوبھی۔ اس میں بہت سی فارماسولوجیکل سرگرمیاں ہیں، جیسے کہ اینٹی کینسر، اینٹی انفلامیٹری، اینٹی آکسیڈیٹیو، نیورو پروٹیکٹو، وغیرہ۔ اس لیے L-thioglutamic ایسڈ کے مصنوعی طریقہ نے بہت زیادہ توجہ مبذول کرائی ہے۔
فی الحال، L-thioglutamic ایسڈ کی ترکیب کے طریقوں کو دو قسموں میں تقسیم کیا جا سکتا ہے: حیاتیاتی ابال اور کیمیائی ترکیب۔ یہ دونوں طریقے ذیل میں تفصیل سے بیان کیے گئے ہیں۔
ایل سلفورافین حیاتیاتی ابال کا طریقہ:
حیاتیاتی ابال کا طریقہ مائکروجنزموں کے ساتھ مرکبات کی ترکیب کا ایک طریقہ ہے۔ بیکٹیریا کے تناؤ کی اسکریننگ اور ثقافت کے حالات کی اصلاح کے ذریعے، مائکروجنزم ابال کے عمل کے دوران L-thioglutamic ایسڈ پیدا کر سکتے ہیں۔ اب یہ پتہ چلا ہے کہ بہت سے تناؤ L-thioglutamic acid کی ترکیب کر سکتے ہیں، جیسے Escherichia coli، Streptococcus thermophilus وغیرہ۔ ان میں سے، ایل تھیوگلوٹامک ایسڈ کی ترکیب سازی کا طریقہ ایسچریچیا کولی کے ذریعہ پیش کردہ تناؤ کے ذریعہ سب سے عام ہے۔ مخصوص اقدامات درج ذیل ہیں:
1. L-thioglutamate پیدا کرنے والے تناؤ، جیسے Escherichia coli کو مٹی یا پودوں کے بافتوں سے الگ کر دیں۔
2. Escherichia coli کی کاشت کے لیے موزوں درمیانی اور ثقافتی حالات، جیسے درجہ حرارت، pH قدر، ثقافت کا وقت، وغیرہ کو اپنائیں؛
3. Escherichia coli ابال کے شوربے کی کٹائی کریں، کچھ پروسیسنگ اور صاف کریں، اور L-thioglutamic acid حاصل کریں۔
ایل سلفورافین کیمیائی ترکیب کا طریقہ:
کیمیائی ترکیب کا طریقہ مختلف مصنوعی راستوں سے L-thioglutamic ایسڈ کی ترکیب کے لیے کیمیائی مالیکیولر رد عمل کا طریقہ استعمال کرنا ہے۔ فی الحال، کیمیائی ترکیب کے طریقوں کو بنیادی طور پر چار اقسام میں تقسیم کیا گیا ہے: کولین نمک کا طریقہ، سلفرائل کلورائیڈ طریقہ، کاربونیل میں کمی کا طریقہ، اور ایگرز سلفیٹ طریقہ۔
1. چولین نمک کا طریقہ:
یہ طریقہ عام طور پر استعمال ہونے والے مصنوعی طریقوں میں سے ایک ہے۔ مندرجہ ذیل کے طور پر آگے بڑھیں:
① سب سے پہلے، L-methionine اور choline کو تیزابیت والے حالات میں رد عمل کے ذریعے L-thioglutamic ایسڈ کا نایاب نائٹروجن متبادل پیدا ہوتا ہے۔
② الکلائن حالات میں L-thioglutamic ایسڈ میں نائٹروجن کو گرم اور ہائیڈرولائز کرنا۔
اس طریقہ کار کا فائدہ یہ ہے کہ ردعمل سادہ اور مہارت حاصل کرنے میں آسان ہے، لیکن پیداوار کم ہے۔
2. سلفونیل کلورائد طریقہ:
یہ طریقہ L-thioglutamic ایسڈ کی ترکیب کے لیے الیکٹرو فیلک متبادل رد عمل کا استعمال کرتا ہے۔ مندرجہ ذیل کے طور پر آگے بڑھیں:
L-thioglutamic ایسڈ سلفینیٹ حاصل کرنے کے لیے الکلائن حالات میں L-methionine اور سلفونیل کلورائیڈ کا رد عمل۔
② سلفیٹ کو الکلائن حالات میں ہائیڈولائز کیا جاتا ہے تاکہ L-thioglutamic ایسڈ پیدا کیا جا سکے۔
اس طریقہ کار کا فائدہ یہ ہے کہ ردعمل کو کنٹرول کرنا آسان ہے اور پیداوار زیادہ ہے، لیکن اس کے لیے زہریلے سلفونائل کلورائیڈ استعمال کرنے کی ضرورت ہے۔
3. کاربونیل میں کمی کا طریقہ:
طریقہ یہ ہے کہ L-thioglutamic ایسڈ کی ترکیب میں کمی کے رد عمل کو استعمال کیا جائے۔ مندرجہ ذیل کے طور پر آگے بڑھیں:
①L-methionine ایک ہی وقت میں pyridine pyrimidin-2-en-4-one اور pyrimidine pyrimidin-2-en-4-one-5-سلفیٹ پیدا کرنے کے لیے acetonimine کے ساتھ رد عمل ظاہر کرتا ہے
②Pyrimidine pyrimidine-2-en-4-ایک-5-سلفیٹ کو L-thioglutamic ایسڈ حاصل کرنے کے لیے کم کیا جاتا ہے۔
4. ایگاروز سلفیٹ کا طریقہ: یہ طریقہ ایل-میتھیونین اور ایگرز سلفیٹ کو تیزابیت والے حالات میں رد عمل ظاہر کرنے کے لیے ہے تاکہ L-thioglutamic ایسڈ پیدا کیا جا سکے۔ سلفیٹ کی اچھی اتپریرک سرگرمی کی وجہ سے، رد عمل کی کارکردگی اور سلیکٹیوٹی بہتر ہوتی ہے۔ اعلی، لیکن کام کرنے کے لئے زیادہ بوجھل.
سائنسی تحقیق میں ایل سلفورافین کا پتہ لگانا بہت ضروری ہے۔ ان میں سے، ایگرز سلفیٹ کا طریقہ کلاسک پتہ لگانے کے طریقوں میں سے ایک ہے۔ اگروز سلفیٹ کا طریقہ اور اس کے اقدامات ذیل میں تفصیل سے بیان کیے جائیں گے۔
تجرباتی اصول
ایگاروز سلفیٹ کا طریقہ ایل-تھیوگالیکٹوپرین اور بیریم سلفیٹ کے ایک پیلے رنگ کے کمپلیکس کی تشکیل پر مبنی ہے، ایک نمک جو تیزابیت کے حالات میں بنتا ہے، ایل- سلفورافین کے طریقہ کار کو الگ کرنے کے لیے ایگرز کو ایک سہار کے طور پر استعمال کرتا ہے۔ یہ طریقہ اس حقیقت پر مبنی ہے کہ تیزابیت کے حالات میں، بیریم سلفیٹ اور ایل سلفورافین کے رد عمل سے بننے والا پیلا کمپلیکس پانی میں آسانی سے حل نہیں ہوتا ہے اور ایگروز میں تیز ہوجاتا ہے، تاکہ ایل سلفورافین کو الگ کرکے اس کا پتہ لگایا جاسکے۔
تجرباتی مراحل:
مرحلہ 1: ایگروز بیریم سلفیٹ سسپنشن تیار کریں۔
ایگروز اور بیریم سلفیٹ کی مناسب مقدار کا وزن کریں، مکس کرنے کے بعد ایک مخصوص مقدار میں ڈسٹل واٹر شامل کریں اور اچھی طرح ہلائیں، اس وقت تک گرم کریں جب تک کہ تحلیل نہ ہو جائے یا یکساں طور پر مکس نہ ہو جائے، سسپنشن کو فلٹر سے فلٹر کریں جس کا تاکنا سائز 0.22um ہے، اور پھر 3 سے 5 منٹ تک ابالیں۔ جب سسپنشن 50 ڈگری سے نیچے ٹھنڈا ہو جائے لیکن پھر بھی ٹھوس نہ ہو، تو محلول کو پیٹری ڈش میں ڈالیں اور اسے کمرے کے درجہ حرارت پر رکھیں جب تک کہ یہ ٹھوس نہ ہو جائے۔
مرحلہ 2: نمونہ کی تیاری اور پروسیسنگ:
جانچنے کے لیے نمونے یا معیار کا وزن کریں، کافی {{0}} شامل کریں۔{9}}پگھلنے کے لیے 1 M سوڈیم پائروفاسفیٹ محلول، نکالنے کے لیے کلوروفارم کے متعلقہ حجم کو شامل کریں، 10-15 منٹ کے لیے سینٹری فیوج ، اوپری پرت کے مائع کو ہٹا دیں، باقیات کو جمع کرنے کے لیے کلوروفارم کو بخارات بنائیں، 2 ملی لیٹر پانی اور 2 ملی لیٹر مرتکز ہائیڈروکلورک ایسڈ شامل کریں، کلوروفارم کے ساتھ دوبارہ نکالا جائے، سینٹری فیوج کیا جائے، اور اوپری تہہ لے لی گئی۔ اوپری مائع کا 24 ملی لیٹر لیں، 0.2 ملی لیٹر 2 فیصد کاپر نائٹریٹ محلول اور 0.4 ملی لیٹر 5 فیصد لیڈ نائٹریٹ محلول شامل کریں، کلوروفارم، سینٹری فیوج کے ساتھ ایک بار نکالیں، اور اوپری مائع لیں، جسے جانچ کے لیے تجرباتی نمونے کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔
مرحلہ 3: دوبارہ تجزیہ کا تجربہ:
نمونوں کو ایگروز بیریم سلفیٹ سسپنشن میں شامل کیا گیا اور 2 گھنٹے تک 80 ڈگری پر ٹھوس ہونے کے لیے پانی کے غسل میں گرم کیا گیا۔ نمونے کے ٹھوس ہونے کے بعد، ایگروز بیریم سلفیٹ معطلی کو کمرے کے درجہ حرارت پر ٹھنڈا کیا جاتا ہے، اور ایگروز بیریم سلفیٹ-سیمپل کمپلیکس سائٹرک ایسڈ اور امونیم نمک کے بفر حالات میں تحلیل ہو جاتا ہے۔ آخر میں، پانی سے ترتیب وار کللا کریں، اور ایگروز کے دائرے میں کمپلیکس کے رنگ کا بصری طور پر معائنہ کریں۔
مرحلہ 4: نتائج کا تجزیہ:
ایک معیاری منحنی خطوط کی تعمیر کے لیے دوبارہ تجزیہ کے بعد فلٹریٹ کے جذب کی پیمائش کریں، اس طرح ایل سلفورافین کا مواد حاصل ہوتا ہے۔
ایگرز سلفیٹ طریقہ ایل سلفورافین کو الگ کرنے اور اس کا پتہ لگانے کا ایک کلاسک طریقہ ہے۔ اقدامات کی ایک سیریز کے ذریعے، ایل سلفورافین کو الگ کیا جا سکتا ہے اور اس کے مواد کا پتہ لگایا جا سکتا ہے۔ اس طریقہ کار میں سادگی، اعلیٰ حساسیت، اور درست نتائج کے فوائد ہیں، اور عام طور پر کھانے، کاسمیٹکس اور دواسازی میں ایل سلفورافین کا پتہ لگانے میں استعمال ہوتا ہے۔
خلاصہ: سائنس اور ٹیکنالوجی کی ترقی کے ساتھ، L-thioglutamic ایسڈ کی ترکیب کے طریقہ کار کو مسلسل بہتر اور بہتر بنایا جا رہا ہے۔ ایک ہی وقت میں، حیاتیاتی ابال کے طریقہ کار اور کیمیائی ترکیب کے طریقہ کار کے بھی اپنے فوائد اور نقصانات ہیں، اور کون سا طریقہ استعمال کرنا ہے اس کا انحصار اصل صورت حال پر ہے۔